ឧបករណ៍សម្រាប់វិស្វកម្មប្រូតេអ៊ីន

01 ប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ Polymerase

02 កំហិតអង់ស៊ីម

ការរកឃើញ អង់ស៊ីម ដែលគេស្គាល់ថាជាការដាក់កម្រិត endonucleases មានសារៈសំខាន់ណាស់ចំពោះ វិស្វកម្មប្រូតេអ៊ីន ។ អង់ហ្ស៊ីមទាំងនេះកាត់ DNA នៅទីតាំងជាក់លាក់ដោយផ្អែកលើលំដាប់នុយក្លេអ៊ែរ។ អង់ហ្ស៊ីមមានកម្រិត ផ្សេងៗគ្នារាប់ពាន់នាក់ដែលមានសមត្ថភាពកាត់ DNA នៅកន្លែងផ្សេងដាច់ដោយឡែកពីបាក់តេរីផ្សេងៗ។ ការកាត់ DNA ជាមួយអង់ស៊ីមកំហិតបង្កើតបំណែកតូចៗជាច្រើនដែលមានទំហំខុសៗគ្នា។ ទាំងនេះអាចត្រូវបានបំបែកដោយប្រើអេឡិចត្រូម៉ាញ៉េទិកឬក្រូម៉ូសូម។

03 Electrophoresis

ការសម្អាត DNA ពីវប្បធម៌កោសិការឬកាត់វាដោយប្រើអង់ស៊ីមកំហិតនឹងមិនមានការប្រើប្រាស់ច្រើនទេប្រសិនបើយើងមិនអាចមើលឃើញឌីអិនអេ - នោះគឺរកវិធីដើម្បីមើលថាតើចំរាញ់របស់អ្នកមានអ្វីឬទំហំដែលអ្នក បានកាត់វាចូល។ វិធីមួយដើម្បីធ្វើដូច្នេះគឺដោយការប្រើអេឡិចត្រូម៉ាញ៉េស្យូម។ ជែលត្រូវបានគេប្រើសម្រាប់គោលបំណងខុសៗគ្នាពីការកាត់ DNA ដើម្បីរកមើល DNA បញ្ចូលនិងការផ្តាច់។

04 ចូលរួមពីរបំណែកឌីអិនអេ

នៅក្នុងការស្រាវជ្រាវហ្សែនវាជារឿយៗត្រូវភ្ជាប់តំណរភ្ជាប់ ADN ពីរឬច្រើនដើម្បីបង្កើតខ្សែសរសៃបញ្ចូលឡើងវិញឬបិទរន្ធដានដែលត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយអង់ស៊ីមរឹតបណ្តឹង។ អង់ស៊ីមដែលហៅថា DNA ligases អាចបង្កើតចំណង covalent រវាងសង្វាក់ nucleotide ។ អង់ស៊ីម ADN polymerase I និងប៉ូនីញូតូតូតគីណាហ្សីក៏មានសារៈសំខាន់ផងដែរនៅក្នុងដំណើរការនេះដើម្បីបំពេញចន្លោះប្រហោងឬផូស្វ័រនៅផ្នែកទី 5 ។

ការជ្រើសរើសគំរូឌីអិនអេដោយស្វ័យប្រវត្តិតូចៗ

DNA ដែលមានរាងជារង្វង់តូចមិនមែនជាផ្នែកនៃហ្សែនបាក់តេរីទេប៉ុន្តែមានសមត្ថភាពចម្លងខ្លួនឯងត្រូវបានគេស្គាល់ថាជាផ្លាទីន។ Plasmids ជាញឹកញាប់ត្រូវបានគេប្រើជា វ៉ិចទ័រ ដើម្បីដឹកជញ្ជូនហ្សែនរវាងអតិសុខុមប្រាណ។ នៅក្នុងជីវបច្ចេកវិទ្យានៅពេលដែលហ្សែននៃចំណាប់អារម្មណ៍ត្រូវបានពង្រីកហើយហ្សែននិងផ្លាសមីដត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយអង់ស៊ីមរឹតបណ្តឹង។ ពួកវាត្រូវបានភ្ជាប់គ្នាបង្កើតនូវអ្វីដែលត្រូវបានគេស្គាល់ថា DNA ជា recombinant ។ មេរោគ DNA (bacteriophage) ក៏អាចត្រូវបានប្រើជាវ៉ិចទ័រផងដែរដូចជា cosmids, plasmid recombinant ដែលមានហ្សែនបាក់តេរី។

06 វិធីដើម្បីផ្លាស់ទីវ៉ិចទ័រទៅក្នុងក្រឡាមួយ

ដំណើរការនៃការផ្ទេរសម្ភារៈសេនេទិចនៅលើវ៉ិចទ័រដូចជាផ្លាសមីដចូលទៅក្នុងកោសិកាថ្មីត្រូវបានគេហៅថាការផ្លាស់ប្តូរ។ បច្ចេកទេសនេះតម្រូវឱ្យកោសិកាម៉ាស៊ីនត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងការផ្លាស់ប្តូរបរិស្ថានដែលធ្វើឱ្យពួកវាមានសមត្ថកិច្ចឬអាចបែកជាបណ្តោះអាសន្នទៅវ៉ិចទ័រ។ ការបែងចែកអគ្គិសនីគឺជាបច្ចេកទេសមួយបែប។ ផ្លាសមីដដែលមានទំហំធំធ្វើឱ្យប្រសិទ្ធភាពរបស់វាថយចុះដោយកោសិកា។ ភាគ DNA ធំជាងមុនត្រូវបានក្លូនដោយងាយដោយប្រើប៉ូតាស្យូម, វីរុសឬវ៉ិចទ័រផ្សេងៗទៀតឬក៏វីរុសនៅក្នុងវិធីសាស្ត្រហៅថាអន្តោប្រវេសន៍។ វ៉ាក់សាំងវីរុសឬវ៉ិចទ័រត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ក្នុង ការបង្កើតឡើងវិញ ប៉ុន្តែអាចបណ្តាលឱ្យបញ្ចូល ADN នៅក្នុងផ្នែកខ្លះនៃក្រូម៉ូសូមរបស់យើងដែលយើងមិនចង់បានវាបង្កឱ្យមានផលវិបាកនិងសូម្បីតែជំងឺមហារីក។

07 វិធីសាស្រ្តក្នុងការជ្រើសរើសហ្សែនហ្សែនហ្គ្រីន

មិនមែនគ្រប់កោសិកាទាំងអស់នឹងប្រើ DNA ក្នុងពេលផ្លាស់ប្តូរទេ។ វាមានសារៈសំខាន់ណាស់ដែលមានវិធីសាស្ត្រមួយដើម្បីរកឱ្យឃើញនូវអ្វីដែលត្រូវធ្វើ។ ជាទូទៅប្លាស៊្មីតផ្ទុកហ្សែនសម្រាប់ភាពធន់ទ្រាំអង់ទីប៊ីយ៉ូទិចនិងកោសិកាបំលែងអាចត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើការបញ្ចេញហ្សែនទាំងនោះនិងសមត្ថភាពរបស់ពួកគេក្នុងការរីកលូតលាស់នៅលើប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយដែលមានអង់ទីប៊ីយូទិក។ វិធីសាស្រ្តនៃជម្រើសផ្សេងគ្នាអាស្រ័យលើវត្តមានរបស់ប្រូតេអ៊ីនអ្នករាយការណ៍ផ្សេងទៀតដូចជាប្រព័ន្ធ x-gal / lacZ ឬប្រូតេអ៊ីនពន្លឺព្រះអាទិត្យដែលអនុញ្ញាតឱ្យជ្រើសរើសដោយពណ៌និងពន្លឺ។