រៀនពីរបៀបបង្កើត TAE Buffer នៅក្នុងជំហានមួយចំនួន

ស័ង្កសីនេះត្រូវបានគេប្រើដើម្បីសិក្សាចលនាឌីអិនអេ

សតិបណ្ដោះអាសន្នរបស់ TAE គឺជាដំណោះស្រាយមួយដែលបង្កើតឡើងដោយមូលដ្ឋាន Tris អាស៊ីតអាសេទីនិងអេដតា (Tris-acetate-EDTA) ។ វាជាប្រហោងជាទូទៅបំផុតដែលត្រូវបានប្រើសម្រាប់ electrophoresis ជែល agarose នៅក្នុងការវិភាគនៃផលិតផលឌីអិនអេដែលបានមកពីការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង PCR ពិធីការបន្សុត DNA ឬការពិសោធន៍ ការក្លូនឌីអិនអេ

សតិបណ្ដោះអាសន្ននេះមានកម្លាំងអ៊ីយ៉ូដទាបនិងសមត្ថភាពរារាំងទាប។ វាសមស្របបំផុតទៅនឹងអេឡិចត្រូម៉ាញ៉េស្យូសនៃឌីអេនអេ (DNA) ដែលមានទំហំធំជាង (> 20 គីឡូតុលា) ហើយនឹងត្រូវបានជំនួសញឹកញាប់ឬដំណើរការឡើងវិញសម្រាប់រយៈពេលយូរ (> 4 ម៉ោង) ពេលវេលារត់ជេល។

ដោយគិតពីចំណុចនេះអ្នកប្រហែលជាចង់ពិចារណាពីការចងចាំជាច្រើន។

ដែលបានផ្ដល់ឱ្យថាសតិបណ្ដោះអាសន្នគឺមានភាពងាយស្រួលក្នុងការធ្វើនិងជំហានអាចត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងឆាប់រហ័សធ្វើឱ្យច្រើនជាងមួយបាច់ក្នុងមួយពេលមិនគួរជាពិសេសការប្រើប្រាស់ពេលវេលាឬពិបាកក្នុងការទាញចេញ។ ដោយប្រើសេចក្តីណែនាំដូចខាងក្រោមវាគួរតែចំណាយពេលត្រឹមតែ 30 នាទីប៉ុណ្ណោះដើម្បីបង្កើតសតិបណ្តោះអាសន្ន TAE ។ នេះជារបៀប:

រៀបចំដំណោះស្រាយភាគហ៊ុននៃ EDTA

សំណូមពរ EDTA (អាស៊ីត ethylenediamine tetraacetic acid) ត្រូវបានរៀបចំមុនពេល។ EDTA នឹងមិនរលាយចូលទៅក្នុងដំណោះស្រាយទាល់តែទំងន់ត្រូវបានកែតម្រូវប្រហែល 8,0 ។ ចំពោះដំណោះស្រាយស្តុក 500 មីលីលីត្រនៃអេទីតលី 0,5 មីលីម៉ែត្រទំងន់ 93,05 ក្រាមនៃអំបិល EDTA disodium (FW = 372,2) ។ រំលាយបាន 400 មីលីលីត្រទឹកdésionizedនិងលៃតម្រូវ pH ជាមួយ hydroxide សូដ្យូម (NaOH) ។ បញ្ចូលដំណោះស្រាយទៅនឹងបរិមាណចុងក្រោយនៃ 500 មីល្លីលីត្រ។

Whip ឡើងដំណោះស្រាយភាគហ៊ុននៃ TAE

ធ្វើដំណោះស្រាយសូលុយស្យុង (50x) ប្រមូលផ្ដុំនៃ TAE ដោយទំងន់ 242 ក្រាមនៃមូលដ្ឋាន Tris (FW = 121.14) និងរំលាយវានៅប្រហែល 750 មីលីលីត្រនៃទឹក deionized ។

បន្ថែមដោយប្រុងប្រយ័ត្ន 57.1 មីលីលីត្រនៃអាស៊ីត glacial និង 100 មីលីលីត្រនៃ EDTA 0.5 មីលីត្រ (pH 8.0) ។ បន្ទាប់ពីនោះសូមកែតម្រូវដំណោះស្រាយទៅនឹងបរិមាណចុងក្រោយនៃ 1 លីត្រ។ ដំណោះស្រាយភាគហ៊ុននេះអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ pH នៃសតិបណ្ដោះអាសន្ននេះមិនត្រូវបានលៃតម្រូវហើយគួរតែមានប្រហែល 8,5 ។

រៀបចំដំណោះស្រាយការងាររបស់ TAE

ដំណោះស្រាយនៃសូលុយស្យុង TAE 1x ត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយគ្រាន់តែពន្យាដំណោះស្រាយភាគហ៊ុនដោយ 50x នៅក្នុងទឹកដែលត្រូវបានបែកខ្ញែក។

កំហាប់រលាយចុងក្រោយគឺ 40 មីលីម៉ែតម៉ែត។ Tris-acetate និង EDTA 1 mM ។ សតិបណ្តោះអាសន្នឥឡូវនេះត្រៀមរួចរាល់សម្រាប់ប្រើក្នុងការប្រើជែលជែរី។

អ្វីដែលអ្នកត្រូវការសម្រាប់សតិបណ្តោះអាសន្ន

ចាប់តាំងពីការធ្វើឱ្យសតិបណ្តោះអាសន្ន TAE តម្រូវឱ្យមានសំណុំណែនាំរហ័សនិងសាមញ្ញចំនួននៃសម្ភារៈដែលត្រូវការសម្រាប់វាគឺមិនលើស។ អ្នកនឹងត្រូវការអំបិល EDTA disodium, មូលដ្ឋាន Tris និងទឹកអាស៊ីត acetic glacial ។

ការធ្វើឱ្យសតិបណ្តោះអាសន្នក៏តម្រូវឱ្យមាន pH ម៉ែត្រនិងស្តង់ដារក្រិតតាមខ្នាតផងដែរ។ អ្នកក៏ត្រូវការកំប៉ុងទឹកដោះគោចំនួន 600 មីល្លីលីត្រនិង 1500 មីលីលីត្រក៏ដូចជាស៊ីឡាំងដែលបញ្ចប់ការសិក្សា។ ចុងបញ្ចប់អ្នកនឹងត្រូវការទឹកដែលមានទឹកមនោសញ្ចេតនារារាំងបារនិងរំញោចចាន។

រុំឡើង

តើអ្នកមានគម្រោងបង្កើតកន្លែងទំនេរនៅឯសាលារៀនកន្លែងធ្វើការឬកន្លែងផ្សេងទៀតដូចជាផ្ទះរបស់អ្នកដែរឬទេ? សូមពិនិត្យមើលសារពើភ័ណ្ឌមុនពេលអ្នកចាប់ផ្តើមធ្វើឱ្យប្រាកដថាអ្នកមានសម្ភារៈទាំងអស់ខាងលើសម្រាប់សតិបណ្ដោះអាសន្ន TAE ។

ប្រសិនបើអ្នកមិនចាំបាច់បង់ថ្លៃសមា្ភារៈទេអ្នកត្រូវបានណែនាំអោយធ្វើសក់ទ្រនាប់នៅខាងក្រៅផ្ទះរបស់អ្នក។ អ្នកអាចបញ្ជាទិញសម្ភារៈដែលអ្នកត្រូវការនៅលើអ៊ិនធរណេតឬទស្សនាហាងលក់ជំនាញពិសេសមួយសម្រាប់ពួកគេ។