តើធ្វើដូចម្តេចដើម្បីធ្វើឱ្យប្រូតេអ៊ីនដុតកម្ទេច

តើធ្វើដូចម្តេចដើម្បីធ្វើឱ្យ Immunohistochemical Staining Buffer នេះ

អំបិលសូដ្យូមផូស្វាត (PBS) គឺជាដំណោះស្រាយសន្សំសំចៃមួយដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅសម្រាប់ស្នាមប្រញាយអ៊ីម៉ូណូ (IHC) ហើយវាត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ក្នុងការស្រាវជ្រាវជីវសាស្រ្ត។ PBS គឺជាដំណោះស្រាយអំបិលទឹកដែលមានជាតិសូដ្យូអាសូតផូស្វាតសូដ្យូមនិងនៅក្នុងករណីខ្លះប៉ូតាស្យូមក្លរួនិងប៉ូតាស្យូម dihydrogen ផូស្ពីត។

ការចាក់ថ្នាំបង្ការរោគ

Immunohistochemistry សំដៅលើដំណើរការនៃការរកឃើញអង់ទីករដូចជាប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងកោសិកានៃផ្នែកជាលិកាដោយប្រើគោលការណ៍អង់ទីករដែលភ្ជាប់ទៅនឹងអង់ស៊ីមនៅក្នុងជាលិកាជីវសាស្រ្ត។

ថ្នាំស្នាមប្រឡាក់ហ្វូណុលហ្វ្លុលសេនគឺជាវិធីសាស្ដ្រស្នាមប្រឡាក់មុន ៗ ។

Antigens អាចមើលឃើញនៅពេលផ្សំជាមួយនឹងអង់ទីករដោយប្រើថ្នាំលាប fluorescence ដោយសារតែប្រតិកម្មភ្ជាប់ប្រតិកម្ម Antigen-Antibody ដំណើរការនេះកើតឡើងនៅពេលដែលវាត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មដោយពន្លឺដ៏រំភើបនៃរលកជាក់លាក់មួយក្រោមមីក្រូទស្សន៍ fluorescent ។

ការប្រមូលផ្តុំអ៊ីស៊ីម៉ែត្រនិងអុីយ៉ុងនៃដំណោះស្រាយត្រូវគ្នាជាមួយនឹងសារធាតុរបស់មនុស្ស។

រូបមន្តសម្រាប់ PBS

អ្នកអាចរៀបចំ PBS តាមវិធីជាច្រើន។ មានរូបមន្តច្រើន។ ពួកគេមួយចំនួនមិនមានប៉ូតាស្យូមទេខណៈដែលសារធាតុផ្សេងៗទៀតមានជាតិកាល់ស្យូមឬ ម៉ាញ៉េស្យូម ។

រូបមន្តនេះគឺងាយស្រួល។ វាជាដំណោះស្រាយភាគហ៊ុន 10X PBS (0.1M) ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយអ្នកក៏អាចបង្កើតដំណោះស្រាយភាគហ៊ុន 1X ឬចាប់ផ្តើមជាមួយរូបមន្ត 10X នេះហើយបន្ថយវាទៅ 1X ។

ដំណើរការទាំងមូលត្រូវចំណាយពេលប្រហែល 10 នាទី។

ជម្រើសមួយដើម្បីបន្ថែម Tween ក៏ត្រូវបានផ្តល់ផងដែរ។

អ្វីដែលអ្នកត្រូវការដើម្បីបង្កើត PBS Buffer

• សូដ្យូមផូស្វុត monobasic (anhydrous)

• សូដ្យូមផូស្វាតឌីបូស្យាស់ (anhydrous)
• សូដ្យូមក្លរួ
• ធ្វើមាត្រដ្ឋាននិងទូកដែលមានទម្ងន់
• stirrer ម៉ាញ៉េនិងរារាំងរបារ
• ការស្ទង់មតិ pH ដែលត្រូវបានក្រិតតាមខ្នាតនិងសមស្របសម្រាប់ការលៃតម្រូវ pH
• ដប volumetric 1 លីត្រ
• Tween 20 (ស្រេចចិត្ត)

តើធ្វើដូចម្តេចដើម្បីធ្វើឱ្យប្រូតេអ៊ីនបាសអំបិល (PBS)

មានទំងន់ 10,9 ក្រាមជាតិសូដ្យូមផូស្វាត dibasic (Na2HPO4), 3.2 ក្រាមសូដ្យូមផូស្វាតសូម៉ូស (NaH2PO4) និង 90 ក្រាមសូដ្យូមក្លរួ (NaCl) ។

រំលាយនៅក្រោមទឹកម៉ាស 1 លីត្រ។

លៃតម្រូវ pH ដល់ 7.4 និងធ្វើឱ្យដំណោះស្រាយឡើងដល់កម្រិតសំឡេងចុងក្រោយនៃ 1 លីត្រ។

បន្ថយ 10X មុនពេលប្រើនិងកែតម្រូវ pH ប្រសិនបើចាំបាច់។

អ្នកអាចបង្កើតដំណោះស្រាយ PBS ដែលមាន Tween 20% 0.5 ដោយបន្ថែម 5mL Tween 20 ទៅដំណោះស្រាយ 1 លីត្រ។

គន្លឹះក្នុងការបង្កើត PBS Buffer

រក្សាទុកសតិបណ្ដោះអាសន្ននៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់បន្ទាប់ពីអ្នកបានបង្កើតដំណោះស្រាយ PBS ។

ថ្នាំ Reagents ដែលមិនមែនជា anhydrous អាចត្រូវបានជំនួសប៉ុន្តែអ្នកនឹងត្រូវគណនាឡើងវិញនូវម៉ាស់សមស្របរបស់គ្នាដើម្បីបំពេញនូវម៉ូលេគុលទឹកបន្ថែម។

ការប្រើប្រាស់នៃប្រូតេអ៊ីនប្រូមប៊ែរប្រៃ (PBS)

អំបិលហ្វាហ្វាតហ្វ្រូសស្យូមមានការប្រើប្រាស់ជាច្រើនព្រោះវាមានជាតិអ៊ីសូតូមនិងគ្មានជាតិពុលចំពោះកោសិកាភាគច្រើន។ វាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីញែកសារធាតុហើយវាត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ដើម្បីលាងជម្រះធុងរបស់កោសិកា។ PBS អាចត្រូវបានគេប្រើជាពពួកវីតាមីនចម្រុះក្នុងវិធីផ្សេងៗដើម្បីធ្វើឱ្យជីវម៉ូលេគុលស្ងួតពីព្រោះម៉ូលេគុលទឹកនៅក្នុងវានឹងត្រូវបានរៀបចំឡើងជុំវិញសារធាតុប្រូតេអ៊ីនឧទាហរណ៍។ វានឹងត្រូវបាន "ស្ងួតហួតហែង" និងរុញទៅលើផ្ទៃរឹង។

pH នៅតែស្ថិតស្ថេរនិងស្របគ្នាដើម្បីការពារការបំផ្លាញកោសិកា។

ខ្សែភាពស្តើងនៃទឹកដែលភ្ជាប់ទៅនឹងសារធាតុការពារការបំលែងឬការផ្លាស់ប្តូរសមស្របផ្សេងទៀត។ សមា្ភារៈសាប៊ូកាបូណាតអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់គោលបំណងតែមួយប៉ុន្តែមានប្រសិទ្ធិភាពតិច។

PBS ក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីយកវិសាលភាពយោងនៅពេលវាស់ការស្រូបយក ប្រូតេអ៊ីន នៅក្នុង ellipsometry ។