សតិបណ្ដោះអាសន្ននេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការបំបែកអេដភីអេស
សតិបណ្ដោះអាសន្នរបស់ TBE មានប្រយោជន៍ជាពិសេសសម្រាប់ការបំបែកបំណែក DNA តូចជាង (MW <1000) ដូចជាផលិតផលតូចៗនៃ អង់ស៊ីមកំហិតអង់ស៊ីម ។
TBE មានសមត្ថភាពទ្រនាប់ខ្ពស់ជាងហើយនឹងផ្តល់នូវគុណភាពច្បាស់ជាង TAE buffer ។ សតិបណ្ដោះអាសន្នរបស់ TAE គឺជាដំណោះស្រាយមួយដែលបង្កើតឡើងដោយមូលដ្ឋាន Tris អាស៊ីតអាសេទីនិងអេដតា (Tris-acetate-EDTA) ។
TBE ជាទូទៅមានតំលៃថ្លៃជាង TAE ហើយរារាំង DNA ligase ដែលអាចបណ្តាលអោយមានបញ្ហាប្រសិនបើការបន្សុទ្ធ DNA ជាបន្តបន្ទាប់និងជំហានតភ្ជាប់ត្រូវបានគេកំណត់។ ជាមួយជំហានសាមញ្ញបីដែលអនុវត្តតាម, រៀនពីរបៀបបង្កើតសតិបណ្ដោះអាសន្ន TBE ។ វាមិនគួរចំណាយពេលច្រើនជាង 30 នាទីដើម្បីបង្កើតសតិបណ្តោះអាសន្ននេះទេ។ នេះជារបៀប:
រៀបចំដំណោះស្រាយភាគហ៊ុននៃ EDTA
ដំណោះស្រាយអាស៊ីត EDTA (អេទីលលីនេម៉ីនតង់សាសេត) គួរតែត្រូវបានរៀបចំទុកជាមុន។ EDTA នឹងមិនត្រូវបានដោះស្រាយទាំងស្រុងទៅក្នុងដំណោះស្រាយទាល់តែ pH ត្រូវបានលៃតម្រូវទៅប្រហែល 8.0 ។ ចំពោះដំណោះស្រាយស្តុក 500 មីលីលីត្រនៃអេទីតលី 0,5 មីលីម៉ែត្រទំងន់ 93,05 ក្រាមនៃអំបិល EDTA disodium (FW = 372,2) ។ បន្ទាប់មករំលាយវានៅក្នុង 400 មីលីលីត្រទឹក deionized និងលៃតម្រូវ pH ជាមួយ NaOH ។ បន្ទាប់មកដាក់បញ្ចូលដំណោះស្រាយទៅនឹងបរិមាណចុងក្រោយនៃ 500 មីល្លីលីត្រ។
រៀបចំដំណោះស្រាយស្តុករបស់ TBE
ធ្វើឱ្យសូលុយស្យុងភាគល្អិតនៃសំណាកប្រូតេអ៊ីន (5x) ប្រមូលផ្ដុំទំងន់ 54 សង់ទីម៉ែត្រដោយទឹកអាស៊ីត bisic acid (FW = 61.13) និងរំលាយទាំងកាល់ស្យូមប្រហែល 900 មីលីលីត្រ។ បន្ទាប់មកបន្ថែម 20 មីលីលីត្រនៃអេដ្យ៉ូម 0.5 មីលីលីត្រ (pH 8.0) និងកែតម្រូវដំណោះស្រាយទៅជាបរិមាណចុងក្រោយនៃ 1 លីត្រ។
ដំណោះស្រាយនេះអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពប៉ុន្តែភ្លៀងនឹងបង្កើតបាននៅក្នុងដំណោះស្រាយចាស់ៗ។ រក្សាទុកសតិបណ្តោះអាសន្នក្នុងដបកែវហើយចោលសំរាមប្រសិនបើមានប្រតិកម្ម។
រៀបចំដំណោះស្រាយការងាររបស់ TBE
សម្រាប់អេឡ៉ៈអេឡិចត្រូសែនជែលអេដឺរអេសអេហ្វអេសអាចត្រូវបានគេប្រើនៅកំហាប់នៃការប្រមូលផ្ដុំដែលមានកំហាប់ 0,5x ។ ពុះដំណោះស្រាយភាគហ៊ុនដោយ 10x នៅក្នុងទឹក deionized ។ កំហាប់រលាយចុងក្រោយគឺ 45 មីលីម៉ែត Tris-borate និង EDTA 1 មីលីម៉ែត។ សតិបណ្តោះអាសន្នឥឡូវនេះត្រៀមរួចរាល់សម្រាប់ប្រើក្នុង ការប្រើជែលជែរី ។
អ្វីដែលអ្នកត្រូវការ
ដើម្បីបង្កើត TBE buffer អ្នកនឹងត្រូវការសារធាតុចំនួន 4 ។ ធាតុដែលនៅសល់ក្នុងបញ្ជីនេះគឺជាឧបករណ៍។ សារធាតុចំនួនបួនដែលត្រូវបានគេតម្រូវគឺអំបិល EDTA disodium, មូលដ្ឋាន Tris, អាស៊ីត boric និងទឹក deionized ។
ចំពោះសម្ភារៈបរិក្ខាអ្នកនឹងត្រូវការម៉ាស់ pH និងស្តង់ដារក្រិតតាមដែលសមរម្យ។ លើសពីនេះទៅទៀតអ្នកនឹងត្រូវការកែច្នៃ 600 មីលីលីត្រនិង 1500 មីល្លីលីត្រ។ ការបំពេញតម្រូវការសម្ភារៈរបស់អ្នកត្រូវបានបញ្ចប់ដោយស៊ីឡាំងនិងរំញោចរង្គសាលហើយរំកិលចាន។
ពិនិត្យមើលសារពើភ័ណ្ឌនៅមន្ទីរពិសោធន៍ដែលអ្នកនឹងប្រើដើម្បីប្រាកដថាអ្នកមានអ្វីគ្រប់យ៉ាងដែលអ្នកត្រូវការមុនពេលអ្នកចាប់ផ្តើម។ គ្មានអ្វីដែលអាក្រក់ជាងការឈប់នៅពាក់កណ្តាលនៃការរៀបចំដំណោះស្រាយនោះទេព្រោះអ្នកបានរត់ចេញពីសម្ភារៈដែលត្រឹមត្រូវ។
ប្រសិនបើមន្ទីរពិសោធន៍របស់អ្នកនៅសាលារៀនឬកន្លែងធ្វើការរបស់អ្នកពិនិត្យមើលជាមួយបុគ្គលិកត្រឹមត្រូវដើម្បីដឹងថាពួកគេមានធាតុទាំងអស់នៅក្នុងឃ្លាំង។ ការធ្វើដូច្នេះអាចជួយសន្សំសំចៃពេលវេលានិងថាមពលរបស់អ្នកនៅទីបំផុត។