រកមើលអ្វីដែលត្រូវការសម្រាប់លទ្ធផល PCR ខ្ពស់

01 ល័ក្ខខ័ណ្ឌមន្ទីរពិសោធន៍ស្អាត

ចាប់តាំងពី PCR មានសមត្ថភាពក្នុងការរកម៉ូលេគុលឌីអិនអេមួយតែមួយវាជាការសំខាន់ដើម្បីរក្សាលក្ខខណ្ឌល្អនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។ ត្រូវពាក់ស្រោមដៃស្រស់ប្រើកែវទឹកកកម្ជុលបំពង់និងគន្លឹះបំពង់និងដំណោះស្រាយមេរោគហើយលាងសម្អាតកន្លែងធ្វើការមុនពេលចាប់ផ្តើមការងារ។

រួមបញ្ចូលទាំងប្រតិកម្មគ្រប់គ្រងជានិច្ចដោយមិនមានគំរូ ADN និងគ្មានអង់ស៊ីមដើម្បីធានាថាលទ្ធផលគឺពិតជាដោយសារតែការពង្រីកនៃគំរូត្រឹមត្រូវ។

មនុស្សភាគច្រើនប្រាកដថាមានដំណោះស្រាយផ្ទាល់ខ្លួនរបស់ពួកគេដែលមិនត្រូវបានចែករំលែកដើម្បីធ្វើឱ្យការដោះស្រាយបញ្ហាកាន់តែងាយស្រួលហើយបំពង់កែច្នៃដែលត្រូវបានកំណត់ជាញឹកញាប់ត្រូវបានទុកសម្រាប់តែ PCR តែប៉ុណ្ណោះ។ បំពង់ DNase និង RNase ដោយឥតគិតថ្លៃ, គន្លឹះ pipette ដែលធន់ទ្រាំនឹងធូលីនិងធ្វើការក្នុងក្រណាត់អញ្ចាញធ្មេញជាមួយពន្លឺកាំរស្មី UV ក៏ជាវិធីដើម្បីកាត់បន្ថយបញ្ហា។

02 សមាសធាតុគីមី

• មានមូលដ្ឋានពី 18 ទៅ 24
• មិនមានរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំទេ (ឧ។ រង្វិលពងស្វាស)
• មានតុល្យភាពនៃ G / C និង A / T គូ
• មិនបំពេញគ្នាទៅវិញទៅមកនៅចុងបញ្ចប់ 3 ជើង
• មានសីតុណ្ហភាពរលាយ (Tm) អំពីសីតុណ្ហភាព 5-10 ដឺក្រេនៅពីក្រោមសីតុណ្ហភាពដែលជាទូទៅមានសីតុណ្ហភាពពី 55 ទៅ 65 អង្សាសេលីស៊ីស។

Tm សម្រាប់ primer ទាំងពីរគួរតែមានភាពស្រដៀងគ្នាសម្រាប់លទ្ធផលល្អបំផុត។

03 ប្រតិកម្មចម្រុះ: ប្លង់និងបឋម

ការប្រមូលផ្តុំ primer ល្អប្រសើរគឺនៅចន្លោះ 0,1 និង 0,6 micromole / L ។ ចំនួននៃគំរូខុសគ្នាអាស្រ័យលើប្រភេទនៃ DNA (មនុស្ស, បាក់តេរី, plasmid) ។

ជាមួយនឹងបរិមាណតិចតួចនៃគំរូមានយុទ្ធសាស្ត្រផ្សេងទៀតដើម្បីកែលម្អលទ្ធផលដូចជាលេខរៀងវដ្តកើនឬការប្រើប្រាស់ "ការចាប់ផ្តើមក្តៅ" ។ ជានិច្ចកាលសាកល្បង primers ថ្មីជាមួយនឹងប្រតិកម្មគ្រប់គ្រងជាវិជ្ជមានដើម្បីឱ្យប្រាកដថាពួកគេធ្វើការក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍ជាក់លាក់របស់អ្នក។

ប្រតិកម្មគីមី: សកម្មភាពអង់ស៊ីម

ការប្រមូលផ្តុំ MgCl2 នៅក្នុងល្បាយប្រតិកម្មអាចជះឥទ្ធិពលដល់លទ្ធផល PCR ហើយអាចដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងប្រតិកម្មរហ័ស។ ម៉ាញ៉េស្យូមបង្កើតជាស្មុគស្មាញរលាយជាមួយ dNTPs ដើម្បីបង្កើតស្រទាប់ជាក់ស្តែងដែលអង់ស៊ីមប៉ូលីមឺរេសបានទទួលស្គាល់។

បរិមាណស្មើគ្នានៃ dNTPs ទាំងបួនក៏ជួយកាត់បន្ថយអត្រាកំហុសនៃសារធាតុ polymerase ផងដែរ។ សារធាតុបន្ថែមមួយចំនួនដូចជា betaine, BSA, សារធាតុសាប៊ូខាប់, DMSO, glycerol និង pyrophosphatase ក៏អាចប៉ះពាល់ដល់ប្រសិទ្ធភាពអង់ហ្ស៊ីមឬប្រសិទ្ធភាពនៃប្រតិកម្មផងដែរ។

05 ប្រភេទនៃ Thermocycler

នៅពេលទិញទំនិញឧបករណ៍បរិក្ខារមន្ទីរពិសោធន៍ត្រូវចងចាំថាម៉ាស៊ីនកំដៅខ្លះមិនសូវច្បាស់ជាងអ្នកដទៃដើម្បីរក្សាសីតុណ្ហភាពពិតប្រាកដ។

នេះគឺជាតំបន់មួយដែលតម្លៃថោកនឹងមិនត្រូវបានសងក្នុងរយៈពេលវែងនៅពេលដែលអ្នកប្រឈមមុខនឹងប្រតិកម្មយឺតយ៉ាវឬប្រើ primers ដែលត្រូវការជួរតូចចង្អៀតនៃសីតុណ្ហភាព។

បំពង់ប្រតិកម្មតិចតួចដែលត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីឱ្យសមនឹងម៉ាក thermocycler ដែលអ្នកកំពុងប្រើក៏ជួយបង្កើនសីតុណ្ហភាពប្រតិកម្ម។

06 ការកំណត់វដ្ត

ការបង្កើនទិន្នផលអាចត្រូវបានសម្រេចដោយបង្កើនពេលវេលាពន្យាររាល់ប្រហែល 20 វដ្តដើម្បីទូទាត់សំណងសម្រាប់អង់ស៊ីមតិចដើម្បីពង្រីកគំរូបន្ថែម។ ជាធម្មតាតិចជាង 40 វដ្តគឺគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីពង្រីកម៉ូលេគុលគំរូតិចជាង 10 ទៅនឹងការផ្តោតអារម្មណ៍ធំល្មមដើម្បីមើលលើ ជែលដែលមានជាតិ bromide ethidium bricide ។